自从Warren和Mashall从人胃粘膜中分离出幽门螺杆菌以来,国内外大量的研究资料表明它与非自身免疫性慢性胃炎和十二指肠溃疡病关系密切。对该菌的免疫学研究也已有不少进展,这对弄清其致病机制、诊断和治疗均有重要意义。我们仅就近年来国外对Hp的免疫学研究现状作一综述。

幽门螺杆菌是慢性B型胃炎的主要原因,与非溃疡性消化不良,胃和十二指肠溃疡及胃癌关系密切。流行病学研究表明,在国人无症状或健康人群Hp总感染率在33.9%~49.6%;在慢性胃炎Hp检出率为50%~80%,胃溃疡为70%~80%,十二指肠溃疡为80%~100%。但Hp感染缺乏临床表现的特征,因而目前仍主要靠实验室诊断。以前国内外诊断Hp的方法无外三大类,一是直接从胃粘膜中检测Hp,包括细菌培养、组织涂片和切片染色;二是尿素酶试验或呼吸试验诊断Hp;三是免疫学方法,如酶联免疫吸附试验等。近年来通过多项研究和方法改进,可克服某些不足之处,下面将国内Hp感染的诊断方法研究近况作一简述。

1 局部和系统免疫

1 通过胃镜

Hp做为一种致病菌,可引起人体特异性和非特异性免疫反应。Wyatt等应用免疫过氧化物酶染色法研究了非溃疡性消化不良病人Hp感染时的局部免疫反应,在所有活动性胃炎病人及部分非活动性胃炎病人均可见细菌被IgA包裹,并且发现IgG和IgM包裹和胃炎的活动性有关。被包裹的细菌多位于粘膜表面,位于胃小凹深部的有些细菌则未被包裹,从而提示这一部位的细菌可以保存下来,免受抗体的伤害。

1.1 病灶冲洗法下接涂片

Kazi等用免疫过氧化物酶染色法对53块胃窦活检标本进行了细胞和体液免疫反应的研究,发现Hp相关性胃炎与无菌的慢性胃炎和正常对照间有明显差异。IgA、分泌成分和补体C3包裹的细菌可见于所有慢性活动性胃炎病人。C3总是与IgA、IgM或两者共同包裹有关,这种现象罕见于没有中性多形核粒细胞浸润的病人,在26例Hp相关性慢性胃炎中,有18例出现上皮内单个核细胞浸润。这些上皮内单个核细胞对T淋巴细胞和组织细胞染色阳性。研究结果提示Hp相关性慢性胃炎时的细胞和体液免疫均显著增强。

组织涂片革兰染色法检测Hp感染简便、快速、敏感性可达80%以上,但也有低于50%的检出率,除与检验医师经验有关,还与取材部位和Hp数量有关。新近何松等对52例慢性胃炎患者在切取胃窦部病变区组织活检的同时,内镜下用生理盐水对病灶冲洗,将总洗液离心后制成涂片比较。结果发现涂片Hp阳性率明显高于切片方法,认为冲洗法覆盖面大,可广泛、反复冲洗,取材较活检更全面,可提高Hp检出率。

Attar等用免疫组化技术研究了21例胃炎的胃粘膜活检标本,发现Hp阳性胃炎组的总T细胞和抑制性T细胞出现例数的比率显著高于该菌阴性组;辅助性T细胞的检出率、自然杀伤细胞的存在与否和B细胞的分布在2组间无差异;粘膜中的IgA,IgG,IgM浆细胞出现于所有病人,但3种产生免疫球蛋白的浆细胞有较高的密度在Hp阳性胃炎则高于阴性者。研究表明有Hp阳性胃炎胃粘膜中浆细胞有较高的密度,且炎症主要是由于过多存在的总T细胞尤其是抑制T细胞所介导,结果提示:Hp在胃粘膜中既引起体液免疫反应,又引起细胞免疫反应。

1.2 胃镜下直接显色法

Das等比较了不同来源的人血清对Hp的调理素活性,
发现不论是没有胃炎或消化性溃疡病症状的对照组或是分离出或未分离出Hp的有症状病人的血清,对Hp有同样好的调理素作用。同时发现调理素作用取决于补体激活的旁路途径而不取决于抗体。上述发现提示:特异性抗体并无防御Hp的作用,血清中抗体仅具有诊断价值。

Hp菌体内含丰富尿素酶能分解尿素,改变pH值。根据这一原理,李增灿等用粉红色素喷洒胃粘膜方法对100例慢性胃炎研究结果显示,粉红色素喷洒法着色率68%;传统切片法HP阳性率为60%;胃溃疡25例着色法阳性率80%,切片法72%;十二指肠溃疡50例,着色法阳性率90%,切片法为80%,表明切片法存在假阴性,而胃镜下直接显色法可提高Hp的检出率。

Bernatowska等用化学荧光系统和电镜检查法研究了三种不同弯曲菌和Hp对中性粒细胞的调理素作用,发现胎儿弯曲菌、结肠弯曲菌和空肠弯曲菌的调理素作用是由抗体介导,由补体增强,而对Hp的吞噬作用则由于它能直接激活补体活化的经典途径而不需要抗体。我们认为这一不寻常的特性在Hp相关性胃炎和十二指肠溃疡的发病机理中可能起重要作用。

1.3 尿素酶活性测定Hp

2 细胞毒性因子

目前诊断Hp常采用的细菌培养,组织染色及尿素酶试验等方法均需内镜取材,且方繁琐,费时,并且结果受Hp斑片状分布的影响。崔东来等根据Hp产生大量尿素酶的原理,采用尿素酶活性诊断Hp,Hp感染者尿素酶活性明显高于无Hp感染者,以尿素酶活性0.31作为截断值,其诊断Hp的敏感性、特异性和准确性分别为95%、84%和93%,而且认为尿素酶活性诊断Hp快速、简便,不受血尿素氮影响等优点,也比测定胃液尿素氮方法优越。

现有资料提示:Hp可能分泌有一种或多种可使细胞发生变性的细胞毒性因子,这在其致病机理中可能具重要作用。Cover和Blaser于1989年在Hp的肉汤培养上清液中发现一种能使培养细胞发生空泡变性的细胞毒素,并证明这个Mr132000的细胞毒素相关性蛋白在活体内可为Hp感染的病人所识别。他们推测这种蛋白质的表达可能在消化性溃疡病的发生机理中起重要作用。

2 血清学

Figura检验了77株Hp细胞毒素产生情况,其中24株来自消化性溃疡病病人,53株来自慢性胃炎但无溃疡的病人,前者有16株、后者亦有16株产生细胞毒素。两者间差异有显著性,提示该毒性物质在消化性溃疡病的发生上起着病因学作用。Morgan给3窝小猪分别口服2株产毒和1株非产毒的Hp,仅产毒株在胃粘膜中定居并出现炎症、粘液减少、细胞内空泡形成和免疫反应,Hp的细胞毒性因子可能是其致病的重要因素。

2.1 ELISA法

美高梅app网页,3 单克隆抗体的制备

通过血清中Hp抗体测定Hp感染的方法比较多,有ELISA法、补体结合试验、单克隆抗体测定法、免疫印迹试验、被动血凝试验和细菌凝集试验等,尤其是ELISA法应用最广。Hp感染后很快会激发机体产生特异性体免疫,血清中出现IgG,IgA,IgM抗体,国内外多采用ELISA法检测HpIgG抗体。

国外已有数篇Hp单克隆抗体研制成功的报道。Negrini等把从培养皿中分离的6株Hp混合后免疫小鼠,32d后将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞P3X63.Ag8.653融合,细胞融合悬液于96孔板上培养生长杂交瘤细胞集落,用整个Hp作靶细胞的间接ELISA法筛选抗体,共获得21株阳性单克隆抗体,其中以CB-26为最好。

2.1.1 HpIgG测定

研究证明单克隆抗体CB-26具有很强的特异性,它不与人红细胞、粒细胞、胃窦腺细胞和胃小凹细胞起反应,也不与非弯曲菌属的Gram阴性菌、甚至空肠、结肠和胎儿弯曲菌起反应。作者等还对60名经内镜检查的病人鉴定了单克隆抗体CB-26辨认胃粘膜刷片中Hp的能力。用间接过氧化物酶染色法在所有32名培养阳性病人中均观察到大量Hp,而在28名培养阴性的病人中也有8例观察到少量细菌,可能是这些病人的活检标本中细菌量过少,不足以培养出来的缘故。这些研究提示单克隆抗体CB-26可能在Hp的快速和特异性检出中具有较高的价值。

在广州地区一项流行病学调查Hp感染率研究中,经1848例人群Hp感染分析,并经组织病理学和细菌培养比较,认为测定HpIgG抗体诊断Hp感染其敏感性和特异性分别达100%和91%。刘勤俭等对235例人群及20多个家庭Hp感染调查时,用间接ELISA法检测血清HpIgG抗体,其敏感性和特异性分别达94%和85%。新近童明庆等介绍了一种斑点—ELISA技术,经对18例慢性胃炎、消化性溃疡患者,19例儿童和22例正常成人行HpIgG抗体测定,患者组抗体检出率72.2%,与快速尿素酶法相比,符合率为83.3%,诊断的敏感性和特异性分别为91.7%和66.7%。认为本法克服了快速尿素酶法需胃镜取材的缺点,因而较适合临床Hp感染的初筛检查和流行病学研究。

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